Czyste czerwone komórki Aplasia i antytrytropoetyna u pacjentów leczonych rekombinowaną erytropoetyną ad 5

Niespecyficzne wiązanie epoetyny znakowanej 125I oznaczano przy użyciu 3 .l surowicy kontrolnej zamiast surowicy pacjenta. Wyniki analizowano zgodnie ze sposobem Scatcharda.14 Kd oznacza stałą powinowactwa dysocjacji. Analiza Scatcharda14 wiązania przeciwciał w surowicy od Pacjenta do epoetyny dała pozornie prostą linię (Figura 3), co sugeruje obecność homogennych miejsc wiązania, chociaż możliwa jest obecność pewnej niejednorodności w wiążących przeciwciałach, ponieważ nie są one monoklonalne. . Widoczna stała powinowactwa do dysocjacji wynosiła 110 pM, a maksymalna zdolność wiązania wynosiła 0,6 .g (60 U) erytropoetyny na mililitr (Figura 3). Wynik ten był zgodny z naszymi przybliżonymi szacunkami uzyskanymi na Fig. 2. Te same eksperymenty przeprowadzono z surowicą od wszystkich 13 pacjentów i wykryto przeciwciała o podobnej charakterystyce (Tabela 3). Dwie klasy miejsc wiążących wykryto w surowicy jednego pacjenta (Pacjent 3), który otrzymał wyłącznie epoetynę beta.
Ponieważ cząsteczki erytropoetyny są silnie glikozylowane, a glikozylacja rekombinowanych cząsteczek różni się nieznacznie od cząsteczki endogennej, 5 testowaliśmy zdolność przeciwciał do rozpoznawania węglowodanów i cząsteczek białka w cząsteczce. Nienaruszona i deglikozylowana epoetyna znakowana 125I była inkubowana z surowicą pacjentów, a radioaktywność związana z IgG była zliczana i analizowana za pomocą elektroforezy w żelu poliakryloamidowym. Przeciwciała wszystkich pacjentów wiążą zarówno glikozylowaną, jak i deglikozylowaną epoetynę znakowaną 125I z taką samą wydajnością, pokazując, że przeciwciała były skierowane przeciwko cząsteczce białka cząsteczki erytropoetyny raczej niż części węglowodanowej (dane nie pokazane).
Surowica od 12 z 13 pacjentów nie wiązała zdenaturowanej epoetyny znakowanej 125I, co sugeruje, że przeciwciała rozpoznają tylko epitopy konformacyjne. Surowica od pacjenta leczonego epoetyną beta (Pacjent 3) odtwarzała w sposób odtwarzalny zdenaturowaną i deglikozylowaną epoetynę znakowaną 125I. Do oceny tej próbki surowicy wykorzystano analizę Scatcharda i deglikozylowaną lub deglikozylowaną zdenaturowaną epoetynę znakowaną 125I. Dwa miejsca wiązania ze stałymi powinowactwa do dysocjacji 80 i 360 pM znaleziono dla deglikozylowanej epoetyny znakowanej 125I. W przypadku deglikozylowanej denaturowanej epoetyny zaobserwowano pojedynczą klasę miejsc wiązania o stałej powinowactwa dysocjacji 70 pM, co sugeruje, że pacjent ten wytwarzał przeciwciała przeciwko zarówno liniowemu, jak i konformacyjnemu epitopowi erytropoetyny (dane nie przedstawione).
Dyskusja
Badaliśmy rozwój czystej aplazji krwinek czerwonych u 13 pacjentów, którzy otrzymywali epoetynę w leczeniu niedokrwistości z przewlekłą niewydolnością nerek. Wszyscy pacjenci otrzymali diagnozę czystej aplazji czerwonych krwinek w ciągu ostatnich trzech lat. Po początkowej odpowiedzi na epoetynę, stały się one poważnie anemiczne i zależne od transfuzji. U wszystkich pacjentów wykryto neutralizujące przeciwciała przeciwko cząsteczce białka epoetyny.
Zanotowaliśmy obecność neutralizujących przeciwciał antytrytropetynowych u pacjenta z czystą aplazją komórek czerwonych, którzy nigdy nie otrzymali epoetyny.10 Nie jesteśmy świadomi podobnych przypadków i uważamy, że przeciwciała neutralizujące przeciwko erytropoetynom są bardzo rzadkie.
[patrz też: płuca bydlęce, homilopatia, charakteropatia ]
[więcej w: eskulap lomza, psychozy endogenne, porencefalia ]